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Thomas Reinard

Molekularbiologische Methoden

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EAN/ISBN
9783838584492
1. 2010

Details

Die Vielfalt der molekularbiologischen Methoden scheint zunächst schwer überschaubar. Glücklicherweise liegen den Methoden oft ähnliche Prinzipien zugrunde, die dieses Buch anschaulich erklärt. Praxisnah wird Wissen vermittelt über:

• Grundlagen der Laborarbeit
• Aufreinigung von DNA, RNA und Proteinen
• Polymerasekettenreaktion und Klonierungsstrategien
• Aufbau von Vektoren und Transformation
• Elektrophorese von DNA, RNA und Proteinen
• Immunbiochemische Methoden
• Methoden für Fortgeschrittene

Bei den vorgestellten Verfahren wird viel Wert auf deren Aktualität und auf ihre praxisnahe Beschreibung gelegt. Damit ist dieses Buch ein wertvoller Begleiter für Bachelor- und Master-Studierende im Bereich der Lebenswissenschaften.

Der umfangreiche Online-Bereich bietet zusätzliche Methoden und Protokolle für den Laboralltag.
  • Molekularbiologische Methodenc1
  • Impressum4
  • Inhaltsverzeichnis5
  • Vorwort7
  • Zu diesem Buch8
  • 1 Das Leben und seine Bestandteile11
  • 1.1 Der Aufbau von DNA und RNA13
  • 1.2 Der genetische Code16
  • 1.3 Die Gene17
  • 1.4 Die Proteine22
  • 1.5 Die Zelle27
  • 2 Grundlagen der Arbeit im Labor29
  • 2.1 Wasser30
  • 2.2 Messung des pH-Wertes31
  • 2.3 Puffer32
  • 2.4 Waagen33
  • 2.5 Mikropipetten34
  • 2.6 Gefäße im Labor36
  • 2.7 Zentrifugen36
  • 2.8 Mischen und Konzentrieren40
  • 2.9 Konzentrieren41
  • 2.10 Pufferwechsel42
  • 2.11 Proben-Lagerung42
  • 2.12 Steriles Arbeiten43
  • 2.13 Die kleinen Freunde – Pflege und Aufzucht von Escherichia coli45
  • 2.14 Der Aufschluss von Geweben50
  • 3 Aufreinigung von Nukleinsäuren53
  • 3.1 Gegenspieler erfolgreicher DNA- und RNA-Isolationen55
  • 3.2 Extraktion von Nukleinsäuren58
  • 3.3 Die weitere Aufreinigung der DNA59
  • 3.4 Einige ausgewählte DNA-Aufreinigungsmethoden66
  • 3.5 Die Isolation von RNA71
  • 3.6 Übersicht über den Einsatz von Kits74
  • 3.7 Tipps zum Erzielen hoher Ausbeuten bei der Isolation von Nukleinsäuren74
  • 3.8 Quantifizierung von Nukleinsäuren75
  • 4 Polymerase Kettenreaktion79
  • 4.1 Prinzip der Polymerase-Kettenreaktion81
  • 4.2 Die Komponenten der PCR81
  • 4.3 Geräte für die PCR90
  • 4.4 Die Standard-PCR91
  • 4.5 Ausgewählte PCR-Methoden91
  • 4.6 Anwendungen der PCR100
  • 4.7 Optimierung der PCR-Reaktion101
  • 5 Klonieren für Einsteiger103
  • 5.1 Restriktionsenzyme105
  • 5.2 Ligation113
  • 5.3 Dephosphorylierung115
  • 5.4 Die Transformation von E. coli117
  • 5.5 Der Weg zum klonierten Gen119
  • 5.6 Der ungerichtete Einbau einer amplifizierten DNA in einen Vektor119
  • 5.7 Der gerichtete Einbau von DNA in einen Vektor122
  • 5.8 Ligase-unabhängige Klonierungssysteme124
  • 6 Vektoren127
  • 6.1 Plasmide129
  • 6.2 Klonierungsplasmide132
  • 6.3 Rekombinase-basierte Klonierung136
  • 6.4 Expressionsplasmide139
  • 6.5 Reportergene143
  • 6.6 Phagen146
  • 6.7 Phagemide147
  • 6.8 Shuttle-Vektoren147
  • 6.9 Künstliche Chromosomen: BACs, PACs und YACs148
  • 6.10 Hefen als Klonierungs- und Expressionssystem149
  • 6.11 Die Transformation von Pflanzen151
  • 6.12 Die Transformation von Säugetieren und tierischen Zellkulturen153
  • 7 Elektrophorese von Nukleinsäuren157
  • 7.1 Agarose-Gelelektrophorese von DNA159
  • 7.2 Die Detektion der DNA im Gel164
  • 7.3 Präparative Agarosegele165
  • 7.4 Auftrennen von RNA im Agarosegel167
  • 7.5 Fehlersuche bei Agarose-Gelelektrophorese168
  • 8 Proteinaufreinigung171
  • 8.1 Homogenisation174
  • 8.2 Extraktion von Proteinen177
  • 8.3 Dialyse und Konzentrierung181
  • 8.4 Weitere Aufreinigungsschritte182
  • 8.5 Quantifizierung von Proteinen186
  • 8.6 Aufreinigungsverfahren für getaggte Proteine aus E. coli189
  • 9 Gelelektrophorese von Proteinen195
  • 9.1 Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE)197
  • 9.2 Die denaturierende SDS-PAGE197
  • 9.3 Das Färben der Gele206
  • 9.4 Weitere Elektrophoreseverfahren für Proteine208
  • 9.5 Western Blotting211
  • 9.6 Wenn es mal nicht klappt …214
  • 10 Immunbiochemische Methoden217
  • 10.1 Antikörper219
  • 10.2 Prinzipien immunbiochemischer Verfahren223
  • 10.3 Spezifische und unspezifische Bindungen229
  • 10.4 Immunbiochemische Verfahren230
  • 10.5 ELISA230
  • 10.6 Immunfärbung nach Western Blot235
  • 10.7 Immunoaffinitätschromatographie237
  • 10.8 Weitere Antikörper-basierte Methoden239
  • 10.9 Wenn es mal nicht klappt …240
  • 11 Molekularbiologie für Fortgeschrittene243
  • 11.1 DNA-Sequenzierung245
  • 11.2 Bioinformatische Sequenzanalyse248
  • 11.3 Der Einsatz der Bioinformatik für die Klonierung von DNA250
  • 11.4 Vollständige Sequenzen durch 3’ RACE-PCR und 5’ RACE-PCR251
  • 11.5 Stammsammlungen253
  • 11.6 Identifizierung von Nukleinsäuren durch Hybridisierung253
  • 11.7 DNA-Chips oder Microarrays255
  • 11.8 Veränderung von Nukleinsäuren256
  • 11.9 Synthetische Gene260
  • Anhang261
  • A1 Sicherheit im Labor262
  • A2 Die 10 goldenen Laborregeln263
  • A3 Das Laborbuch und die finale Arbeit264
  • Verzeichnis der Maps266
  • Verzeichnis der Protokolle266
  • Verzeichnis der E-Docs266
  • Tabellenverzeichnis266
  • Abkürzungsverzeichnis268
  • Quellenverzeichnis268
  • Register269